一、大鼠脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒特点概述
1.专一性强。抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。
2.灵敏度高。由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。
3.样品易保存。经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定,因此有利于样品的保存。
4.结果易观察。对检测结果即可用肉眼观察,又可用显微镜观察,也可以用分光光度计进行比色测定,还可用显微镜观察。这是因为某些酶反应产物能使电子密度发生改变,从而引起被检测物的显示。
5.可以定量测定。溶液中的抗原物质,应用酶免吸附技术进行比色测定,依据光密度值的变化,可以定量。预计用细胞分光光度计可对组织内的抗原进行免疫酶技术的定量测定。
6.可以大规模测定样品。如有成千上万份样品需要进行检测,免疫酶技术都能在较短时间内完成。
7.仪器和试剂简单。对免疫没技术来说,不需要荧光显微镜,也不需要测定放射性的特殊仪器,所用仪器及试剂均属一般性仪器与试剂,普通实验室及生产应用单位均易购置
8.价格X惠,质量保证,X大限度的节省实验经费。
二、标本要求
1. 血清::温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
三、“大鼠脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒”操作流程(具体请参照说明书)
① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干
② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加终止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值
四、大鼠脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒操作问题:
试剂准备不当可能影响酶联免疫吸附测定ELISA结果
在实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此,在ELISA测定中试剂的准备X为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20min以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。
五、“大鼠脱氧吡啶啉(DPD)ELISA试剂盒”注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间X好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,X好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请X后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。