一、“人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒”简介
【检测方法】:酶联免疫法/酶免法(ELISA)
【产品性状】:96T/48T,盒装液体(两种统一规格)
【贮藏条件】:2-8°C
【有 效 期】:二年,我公司Elisa试剂盒均为X新批次,可放心购买。
【主要成分】:酶标板,试剂,标准品等。
【种 属】马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
【产品单价】(ELISA试剂盒具体折扣来电咨询),可免费代测,含税含运费。
【标 本】血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等
注:标本必须为液体,不含沉淀。
二、实验原理:
ELISA试剂盒原理
ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
三、人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒X点:
我司共有14000余种ELISA试剂盒物种涵盖Human,Mouse,Rat等,畅销品种具备以下X点:
极高品质—高品质的抗体和试剂是ELISA试剂盒的基础
X特异—特异检测目标分子,结果X可重复
高度灵敏—可检测到pg/mLX别的目标
种类齐全—可覆盖人、大鼠、小鼠、棉鼠、猕猴、猪、马、犬和猫等多个种属
X化设计—可拆卸式96孔板(12X8),为血清、血浆、尿样和细胞培养物样本检测进行X化
四、“人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒”具体操作方法
以双抗体夹心法为例展示:
1、双抗体夹心法检测抗原
操作步骤如下:
1)将特异性抗体与固相载体结合,形成固相抗体。洗涤除去尚未结
合的抗体及一些杂质。
2)加入待测标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4)加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要获得针对受检抗原的特异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标所使用的抗体X好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成"夹心复合物"。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)时,应注意可测范围的X高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
五、ELISA 技术的-操作要点
X质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA 检测结果准确可靠的必要条件。ELISA 的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA 各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能得出准确的结果。
标本的采取和保存
可用作 ELISA 测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA 检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血块收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA 中血浆和血清可同等应用。
血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP 为标记的ELISA 测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性 HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法 ELISA 中可使本底加深。
一般说来,在 5 天内测定的血清标本可放置于4℃,X过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。
六、ELISA试剂盒代测服务
服务项目 | 内容说明 | 提交结果 | 周期 |
间接法ELISA检测 | 客户提供检测材料 | 检测试验报告 | 1周 |
夹心法ELISA检测 | 客户提供检测材料和检测试剂盒 | 检测试验报告 | 1周 |
竞争法ELISA检测 | 客户提供检测材料和检测试剂盒 | 检测试验报告 | 2周 |
七、“人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒”咨询和订购的方法
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