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详 细 说 明 | ||||||||||||||||
M5 T4 DNA ligase是将源于T4噬菌体的T4 DNA连接酶基因在大肠杆菌中高效表达,经过多次柱层析纯化而获得的高效率、高纯度、高活性的DNA连接酶。该酶具有催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键的特性。不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。M5 T4 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有X高的活性和纯度。 【储存条件】 长期保存,请置于-20?C,X期24个月。经常使用,也请置于-20?C保存,建议客户将M5 T4 DNA Ligase Buffer分装保存,以保证缓冲液中的活性物质稳定。 (以粘性末端活性单位)1单位是指在20μl 1×M5 T4 DNA ligase反应缓冲液中,16?C反应条件下,30分钟能使50%经HindIII消化的λDNA片段[5’端浓度为0.12μM (300 μg/ml)]连接所需要的酶量。 【反应条件】 1X M5 T4 DNA Ligase反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5 @25?C), 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1mM ATP。推荐DNA 5’末端浓度为0.1-1.0μM, 16?C温育。热失活:65?C10分钟。 【注意事项】 ATP是反应必须的辅因子。而大肠杆菌DNA连接酶则需要NAD作为辅因子。如T4 DNA连接酶稀释后于-20?C贮存,应选用含50%甘油的贮存缓冲液;如稀释后立即使用,则用1×T4 DNA连接酶缓冲液稀释即可。 |