1)代测收费情况?帮忙处理标本收费吗?
答:客户购买我们的试剂盒的前提下,代测是免费。
2)收集样本,一般都收集哪些?
答:客户从种属身上提取的,包括血液,、、、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞上清、组织匀浆,唾液等标本,植物的,组织,叶,汁,根,粪便,牛奶等
答:孔是复孔:更好的检验样本接近的值,避免假阳性。测复孔可以取两个结果的平均值,结果更。
4)用什么仪器来检测?
答:采用酶免仪器来检测,所有酶标仪的标长都是450nm.
一、样本
样本处理原则:所有的样本,用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),如果以后碰到其他的样本,也按这个,纳入汇总表。
1、:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如出现沉淀,应再次离心。
2、:应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应该再次离心。
3、:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
4、胸腹水:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
5、脑脊液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
6、唾液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
7、细胞上清:检测性的成份时,用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
8、牛奶:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
9、蜂蜜:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
10、全血:用含有抗凝剂的无菌管收集,立即轻轻摇动,来回轻轻颠倒数次,使血液和抗凝剂混匀,以防血液凝固。
二、固体样本
固体样本处理原则:称取1g的固体样本,用9g的缓冲液溶解,蛋白可以直接离心取上清检测,细胞内的蛋白,要先收集细胞,再用破碎,离心取上清。
1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨;
2、细胞内蛋白样本
许多待测蛋白不是蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。
(1)的细胞
A、动物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用X声波破碎),以使细胞并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
B、植物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,置于冰盒上,用X声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的,充分破碎细胞,以使细胞并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)组织的细胞
切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎破碎细胞。
3、土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测蛋白,直接取上清检测,细胞内蛋白,要破碎细胞。
4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽拭子并挤干,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测蛋白,直接取上清检测,细胞内蛋白,要破碎细胞。
5.植物标本中相关酶或蛋白的测定:(粗提取)
1、新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;
2、加入样品体积9倍的提取液(pH?7.4?PBS缓冲液),3、?请于4度,8000rpm,离心30分钟,取上清并暂时保存于4度待用。